生化SOP文件腺苷脱氨酶ADA速

　应用仪器：全自动生化分析仪原理：ADA检测基于腺嘌呤核苷脱氨转变为次黄嘌呤核苷，再经嘌呤核苷磷酸化酶（PNP）作用生成次黄嘌呤。次黄嘌呤经次黄嘌呤氧化酶（XOD）作用转变为尿酸和过氧化氢（H2O2）。H2O2在过氧化物酶（POD）存在的情况下，可与N-乙醛-N-（2-羟基-3-硫丙基）-3-甲基苯胺（EHSPT）和氨基安替比林（4-AA）生成醌染料，动力学法连续监测醌浓度。全部酶反应如下：组成成分：溶液A：TRIS缓冲液（PH8.0）……………25mmol/L4-AA………………………………………4mmol/LPNP………………………………………0.3U/mlXO…………………………………………0.4U/ml过氧化物酶…………………………………0.1U/ml溶液B：TRIS缓冲液（PH4.0）…………25mmol/L腺苷…………………………………………11mmol/LEHSPT………………………………………4mmol/L标本：1、用真空采样管采集所有血液标本。2、离心前使标本完全自然形成凝块。3、保持样品管的密闭状态。4、抽血后2小时内完成离心和冷藏。5、血清和血浆需用物理方法尽快与细胞分离。6、去除所有可能存在的纤维蛋白和细胞成分，否则会得到假阳性结果。7、如果48小时内不能完成检测即应将标本放入-20℃冰箱冻藏。8、标本只能复溶一次，检测前须将复溶标本离心处理。不要用水浴方法复溶标本。9、吸取血浆标本时应避免将红细胞层上的白细胞或血小板层吸出。10、含有颗粒物质的浑浊血清或血浆标本在检测前须先从原始管内转运出来，并重新离心，原始管中含有分离介质（分离胶）的可以不再离心。11、如果标本不在24小时内检测或运送标本时，将标本保存在-20℃或更低温度的环境中。12、标本不能溶血。工作液的配制：双液体试剂直接使用。操作参数：波长：nm比色杯光径：1cm测量：相对于空气反应温度：37℃操作步骤：工作液和比色杯保温到37℃；实验期间温度应恒定在37℃±0.5℃

微量

工作液

R1

μl

R3

90μl

标本

5.0μl

混匀，准确记录时间，放设定温度1分钟后在波长nm处，以蒸馏水校零，连续监测1-3分钟，计算△A/min。计算：ADA（U/L）=△A/min×F线性范围：0～U/L较准品：本实验室采用罗氏公司生产的定值血清。室内质控：本实验室采用省检验中心提供的质控血清。参考范围：4～24U/L注意事项：1、仅用于体外检测，严禁用嘴吹吸试管。遵守实验室及试剂的常规安全注意事项。2、试剂R1中含有叠氮钠，避免沾到皮肤或黏膜上，若沾到皮肤或黏膜上应立即用大量清水冲洗，医院处理。3、叠氮钠会与管道系统中的铅和铜发生反应，生成潜在爆炸产物。处理这些试剂时，应用大量清水冲洗以防止叠氮化爆炸物形成。与试剂接触的金属表面，应用10%NaOH清洗。4、自动分析血有各种自动生化分析仪的上机操作参数，具体可向本公司查询。临床意义：ADA能催化腺苷转变为次黄嘌呤核苷。ADA广泛分布于人体个组织中，T淋巴细胞含量尤其高。血清ADA活性升高见于急性肝炎、酒精性肝纤维化、慢性活动性肝炎、肝硬化、病毒性肝炎和肝细胞瘤病人，结核病渗出液中也可见ADA活性增高。结合ALT或γ-GT，检测病人血清ADA活性对肝脏疾病诊断更有独特价值。ADA检测还有助于结核诊断。1、肝汩疾病：急性病毒性肝炎、慢性活动性肝炎、肝硬化和肝癌等肝病ADA活性均不同程度升高，以肝硬化最明显。与ALT同时测定，对判断肝细胞的恢复程度程度价值更大。阻塞性黄疸时，ADA活性很少升高，故有助于黄疸的鉴别。2、伤寒、传染性单核细胞增多症、风湿热、溶血性贫血、白血病及某些肿瘤患者血ADA活性亦可升高。3、结核性胸水中ADA活性明显高于癌性和非炎性积液，且胸水ADA活性及其比值1。因此，血清ADA和胸水ADA活性及其比值测定，对鉴别积液的性质有重要意义。4、结核性脑膜炎脑脊液ADA活性明显高于化脓性脑膜炎、病毒性脑膜炎、脑出血、脑梗死、脑外伤等。

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