指南中国宏基因组学第二代测序技术检测感染

二、二代测序的临床需求与应用范围

１．二代测序在临床疑似中枢神经系统感染中的适用范围

推荐意见３：对于怀疑中枢神经系统急性感染的患者，如有条件，推荐在抽取脑脊液时同步留取２mＬ脑脊液标本保存于－１６～２０℃冰箱。在完成常规生物化学检查和培养之后，若３ｄ内未获得明确的病原学依据且经验性抗感染治疗无效，推荐对留存的脑脊液标本进行二代测序检测。若未留存标本，可重新采集标本（Ａ，Ⅱ）。

推荐意见４：对于疑似中枢神经系统病毒感染的患者，如有条件，推荐在抽取脑脊液时同步留取2ｍＬ脑脊液标本保存于－１６～２０℃冰箱。在传统ＰＣＲ分子检测（包括多重探针分子ＰＣＲ方法）后若未能获得明确的病原学依据，推荐对留存的脑脊液标本进行二代测序检测。若未留存标本，可重新采集标本（Ａ，Ⅱ）。

推荐意见５：对于慢性中枢神经系统感染及需要随访病原学证据的患者，可首选二代测序进行检测（Ａ，Ⅱ）。

中枢神经系统感染的临床表现和实验室检查包括以下一种或多种：发热（体温＞３８℃）、头痛、脑膜刺激征、呕吐、抽搐、局灶性神经功能障碍、意识改变或嗜睡、脑脊液中白细胞数量增加、脑脊液中蛋白质水平升高和（或）葡萄糖水平降低、脑成像显示感染的改变。

目前，在常见病原体之外，二代测序在中枢神经系统感染中已成功检测到多种新发及少见病原体，如羊布鲁菌、星状病毒、热带假丝酵母、狒狒巴拉姆希阿米巴等［8］。对于慢性中枢神经系统感染的患者，二代测序检测罕见、少见病原体的能力可显著提高患者病原学确诊的概率。在一项针对结核性脑膜炎患者的队列研究中，二代测序被证实可提高患者的病原体检出率［11］。

对于中枢神经系统感染进展的临床动态监测，主要以临床表现、脑脊液常规实验室检查结果和脑脊液培养为指导。在某些情况下的特异性免疫试验如隐球菌乳胶凝集试验，可间接监测病原体的载量情况。由于二代测序可检测病原体及其匹配的序列数，所以能直接并结合宿主内标背景值半定量地显示病原菌载量的动态变化［12］。

对于急性中枢神经系统感染的患者，在完成常规生物化学检查和培养之后，若仍未获得明确的病原学依据，建议将二代测序作为二线首选检测手段。对于疑似中枢神经系统病毒感染的患者，在传统ＰＣＲ检测后若未能获得明确的病原学依据，建议将二代测序作为二线首选检测手段。对于慢性中枢神经系统感染及需要随访病原学证据的患者，可首选二代测序进行检测。

２．二代测序在临床疑似血流感染中的适用范围

推荐意见6：对于怀疑血流感染的患者，如有条件，推荐在抽取血培养标本时同步留取２ｍＬ血标本，分离血浆后保存于－１６～２０℃冰箱，血培养３ｄ未报阳且经验性抗感染治疗无效时，推荐对留存血标本进行二代测序检测。若未留存标本，可重新采集标本（Ａ，Ⅱ）。

推荐意见7：对于怀疑继发性血流感染的患者，在原发感染灶的病原学检测为阴性或因各种因素无法送检合适标本的情况下，可考虑将血标本的二代测序检测作为二线检测方法（Ｂ，Ⅲ）。

血流感染包括各种病原微生物（包括细菌、真菌、病毒、寄生虫等）入侵血流所引起的感染。除单纯性血流感染外，血流感染还包括感染性心内膜炎、导管相关性血流感染等复杂性感染。血流感染可为原发性，亦可继发于局灶性感染。应注意的是，只要患者具有器官功能障碍且合并任何类型的感染均可诊断为脓毒症，因而脓毒症患者并不一定存在血流感染。血流感染的典型症状主要为畏寒、寒战、发热和毒血症的症状，此外尚包括原发感染灶及迁徙性感染灶的临床表现。部分血流感染患者还具有某些危险因素，包括近期的有创操作史、血管内植入物和吸毒史等。血流感染患者常有外周血白细胞及中性粒细胞计数异常、CRP及ESR升高等实验室检查异常现象，但此类异常缺乏特异性。细菌性血流感染患者还常有降钙素原水平显著升高的现象。

血流感染的非选择性二代测序检测范围涵盖细菌、真菌、病毒（鼻病毒、腺病毒、ＣＭＶ等）、不典型病原体（柯克斯体、巴尔通体等）。由于大部分血流感染的病原体［包括细菌、真菌、寄生虫（如疟原虫）、部分病毒（如疱疹病毒）］均以ＤＮＡ作为遗传物质，所以推荐将ＤＮＡ二代测序作为血流感染的首选检测方法，仅在不能排除ＲＮＡ病毒感染（如肾综合征出血热、登革热、病毒性肺炎等）时推荐进行ＲＮＡ测序［13］。

目前，由于缺乏抗感染治疗对二代测序诊断性能影响的高等级研究，所以在血流感染中二代测序检测的最佳时间窗仍未确定。研究提示，二代测序在患者起病后１～２周的时间内仍可保持高于培养的阳性率，但其仍可随时间推移下降［13］。此外，血培养与血二代测序存在优势互补的情况。故目前推荐在患者起病后尽快进行二代测序检测，如有条件，可在采取血培养标本的同时留取血液标本保存于－１６～２０℃环境，以备后续的二代测序检测。在已经接受治疗的患者中进行血二代测序作为补充检测仍有较大价值。

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